无论是外显子产生的终止密码子突变还是mRNA异常剪接后产生的终止密码子突变，都有可能会被RNA监测机制识别并降解，mRNA 降解途径是在细胞中调节基因表达的一个重要步骤，翻译 mRNA 监视主要有三种形式: nonsense-mediated decay (NMD), no-go decay (NGD) 和 nonstop decay (NSD)，只要是提前产生了PTC都有必要考虑NMD降解。

验证NMD降解途径目前主要有敲低/敲除UPF1后的回复实验，CHX放线菌酮实验，添加NMD抑制剂实验，海创科业开发了一种极其简单的工具方法适用于绝大多数剪接突变，终止突变和移码终止突变，通过RNA剪接的EJC标记，屏蔽NMD识别标记物，只需要通过2套质粒即可验证RNA的剪接，蛋白的翻译问题，将从mRNA水平和蛋白水平两方面来论证，我们可以共同讨论选择实验方案来完成您的研究。

服务流程

价格及周期

服务类型

价格/元

周期

备注

NMD降解验证

评估报价

评估

客户提供

基因突变位点信息，定位转录本号，样本合子类型

携带突变的DNA或者血样，DNA要求浓度大于30ng/ul，体积大于20ul，血样要求大于0.5ml（可选，提供与否都可以开展实验，价格不变）

交付标准

构建好的minigene质粒（Wild type / Mutant type)

相关测序结果

Western blot相关数据

qRT-PCR相关数据

实验报告（包括实验方法，原始图具，分析结果等）

技术原理（示例）

实验例

样品名

质粒描述

使用细胞

是否可以被NMD识别

Wild type1

野生型对照质粒

293T

是

Mutant type1

剪接突变质粒

293T

是

Wild type2

野生型对照质粒

293T

否

Mutant type2

剪接突变质粒

293T

否

A：RT-PCR剪接电泳图，突变造成了外显子的片段缺失；

B：剪接示意图；

C：EGFP荧光图片，突变导致蛋白翻译的降低；

D：Western blot验证蛋白表达；

E：mRNA相对表达量；

F：蛋白相对表达量